Pelajik ve bentik balıklarının solungaçlarından saflaştırılan karbonikanhidraz aktivitelerinin irdelenmesi

Abstract

Bu çalışmada denizel ortamda bentik bölgede yaşayan Mezgit ve pelajik bölgede yaşayan Hamsi balıklarının solungaçlarından karbonik anhidraz (CA) saflaştırıldı ve karakterize edildi. Mezgit balığı solungacından elde edilen CA enzimi, Sepharose-4B-L tirozin-sülfanilamid afinite kolonunda 14 kat ve %19,5 verimle saflaştırıldı. Hamsi balığı solungacından elde edilen CA enzimi ise 17 kat ve %9,5 verimle saflaştırıldı. Mezgit ve Hamsi balıklarının özgül aktiviteleri sırasıyla 126,4 EU/mg protein ve 1.000,0 EU/mg protein olarak belirlendi. SDS-PAG Elektroforezi sonucunda her iki balığın solungaçlarından saflaştırılan karbonik anhidrazların altbirim molekül kütlesi yaklaşık 29 kDa olan tek protein bantlarına sahip oldukları belirlendi. Solungaçlarından elde edilen CA'ların p-nitrofenil asetat substratı varlığında esteraz aktiviteleri pH 8,0'da ve 40 oC sıcaklıkta en yüksek olduğu belirlendi. Mezgit ve Hamsi balıklarının solungaçlarından saflaştırılan CA' nın, p-nitrofenol asetat substratı varlığında Km ve Vmaks değerleri Lineweaver-Burk grafiğiyle hesaplandı ve sırasıyla Km değeri 0,08 mM ve 0,01 mM, Vmaks değeri 1x107 ?M/dak ve 2,5x106 ?M/dak olarak tespit edildi. Mezgit ve Hamsi balıklarının solungaçlarından elde edilen CA' nın sırasıyla sülfanilamid inhibitörü varlığında 6,0 µM ile 4,0 ?M ve asetazolamid inhibitörü varlığında ise 2,0 µM ile 2,0 ?M IC50 değerlerine sahip olduğu tespit edildi.In this study, carbonic anhydrase (CA) was purified and characterized from the gills of anchovy fish living in the pelagic region and whiting living in the benthic region in marine environment. Carbonic anhydrase from the whiting gill was purified 14 fold and %19.5 yield using Sepharose-4B-L tyrosine-sulfanilamide affinity column. Also, carbonic anhydrase from the anchovy gill was purified 17 fold and %9.5 yield using same column. The specific activity of whiting and anchovy fish were determined as 126.4 EU / mg protein and 1,000.0 EU / mg protein, respectively. SDS-PAG Electrophoresis showed that the carbonic anhydrases purified from the gills of both fish had single protein bands with a subunit molecular mass of approximately 29 kDa. In the presence of p-nitrophenyl acetate substratum of gills, esterase activities were found to be highest at pH 8.0 and 40 ° C. The values of Km and Vmax of carbonic anhydrase from the gills of whiting and anchovy fish were calculated by Lineweaver-Burk graph in the presence of p-nitrophenol acetate substrate and Km values were determined as 0.08 mM and 0.01 mM respectively, Vmax value was 1x107 ??M / min and 2.5x106 ?M / min, respectively. It was determined that the CA obtained from the gills of whiting and anchovy fish had an IC50 value of 6.0 µM to 4.0 µM against the sulfanilamide inhibitör, respectively and 2.0 µM to 2.0 µM, against the acetazolamide inhibitör.