Thymus praecox Opiz subsp. caucasicus var. caucasicus bitkisinin antosiyanidinlerinin HPLC-UV ile aydınlatılması

Abstract

Birçok meyve ve sebzede doğal olarak bulunan fenolik bileşikler, sahip oldukları antioksidan, antiviral ve antitümör gibi önemli biyolojik aktiviteleri nedeniyle ilgi çekmektedir. Fenolik bileşikler, fenolik asitler ve flavonoidler olmak üzere iki kısımda incelenmektedir. Antosiyanidinler, flavonoid grubunda yer alan renkli bileşiklerdir. Fenolik bileşikler, bitkiler tarafından ikincil metabolitler olarak sentezlenmektedir. Bir kekik türü olan Anzer çayı (Thymus praecox Opiz subsp. caucasicus var. caucasicus) Anzer balını oluşturan bitkilerdendir ve yerel halk tarafından şifa kaynağı olarak kullanılır. Renkli çiçeklere sahip olan bitkinin antosiyanidinlerinin HPLC-UV ile analizleri bu tez çalışmasında yapıldı. Antosiyanidinlerin HPLC-UV analizleri için öncelikle uygun metot geliştirildi. Anzer çayından antosiyanidinleri izole etmek için uygun ekstraksiyon yöntemi seçildi ve asit hidrolizi de dahil üç farklı yöntemle kullanıldı. Ayrıca kararsız bileşikler olan antosiyanidinlerin kararlılığı, pH 1?de, 1 mg.L-1 ve 10 mg.L-1 konsantrasyonlarda hazırlanan siyanidin standardı ve iki farklı anzer çayı ekstraktının, -18?C?de 50 gün boyunca zamana bağlı miktar değişimleri, HPLC-UV analizleri kullanılarak incelendi. Anzer çayı ekstraktlarında, siyanidin ve pelargonidin tespit edildi. Hidrolizli ile hidroliz edilmeyen ekstraktlar karşılaştırıldığında, hidrolizden önce 11 pik gözlenirken hidrolizin ardından pik sayısı siyanidin dahil 3?e düşmüştür. Hidrolizli ekstrakttaki siyanidin miktarı diğer iki pikin siyanidin eşdeğerine göre 2,28 ve 10,55 kat daha fazladır. Bu veriler ışığında bitkinin başlıca siyanidin glikozitlerince zengin bir antosiyanin içeriğine sahip olduğu sonucuna varıldı. Siyanidin standardının kararlılık testi sonuçlarına göre -18?C?de, pH 1?de 50 gün sonunda her analiz gününde ardışık olarak analiz edilen 1 mg.L-1 ve 10 mg.L-1 konsantrasyonlarda %60 ve % 90?a varan azalma gözlendi. 1mg.L-1 ve 10 mg.L-1 konsantrasyonlu sadece belirlenen günde analizi yapılan çözeltilerinde ise %20 civarında konsantrasyon kaybı gözlendi. Anzer çayının hidrolizli ve hidrolizsiz iki ekstraktının 50 gün sonundaki konsantrasyon kayıplarının benzer bir şekilde % 85 civarında olduğu gözlendi. Anahtar kelimeler: Antosiyanidin, Anzer çayı, HPLC-UV, siyanidinin kararlılığı. Phenolic compounds, found naturally in many fruits and vegetables, draw attention due to they have important biological activities such as antioxidant, antiviral and antitumor. Phenolic compounds are examined as phenolic acids and flavonoids into two parts. Anthocyanidins are colorful compounds placed in the group of flavonoids. Phenolic compounds are synthesized by plants, as secondary metabolites. Anzer tea (Thymus praecox Opiz subsp. caucasicus var. caucasicus), as a type of thyme, is in a herbs constituting Anzer honey and being used as a healing source by local people. Plant with colorful flowers was analyzed by HPLC-UV for its anthocyanidins in this thesis. An appropriate method has been developed primarily for HPLC-UV analysis of anthocyanidins. Suitable extraction method was chosen to isolate anthocyanidins from Anzer tea and three different methods were used, including acid hydrolysis. Also the stability of anthocyanidins as unstable compounds, was investigated with cyanidin standard into two different concentrations 1 mg.l-1 and 10 mg.l-1 and two different anzer tea extracts prepared in pH 1, 50 days during at -18 ? C for the time-dependent changes in the amount, using HPLC-UV analysis. Cyanidin and pelargonidin were detected in the Anzer tea extracts. Comparing non-hydrolyzed extracts with hydrolyzed one, while 11 different peaks were observed before hydrolysis, they have dropped to 3 peaks including cyanidin after hydrolysis. The amount of cyanidin was greater than the cyanidin equivalent of the other two peaks 2.28 and 10.55 times in the hydrolyzed extract. In the light of these datas, it is concluded that the plant has the main content being rich of cyanidin glycosides. According to the result of stability test of cyanidin standard, at -18?C and pH 1 after 50 days, it is observed that the standards analyzed sequentially in every analysis day at 1 mg.L-1 and 10 mg.L-1 concentrations were decreased 60% and 90% consequently. It is observed that the concentrations of the standards, at the concentrations of 1mg.L-1 and 10mg.L-1 and analyzed only one single day, were decreased around 20%. The loss of concentration was observed around 85% at the hydrolyzed and non-hydrolyzed two Anzer tea extracts at the end of 50 days. Anahtar kelimeler: Anthocyanidin, Anzer tea, HPLC-UV, the stability of cyanidine.